Iranian Journal of Endocrinology and Metabolism

fa ارزیابی ‌اثرات‌ کاهش ‌بیان‌ ژن TNF-α بر ‌مقاومت ‌به‌ انسولین ‌القاء شده با پالمیتات در ‌سلول‌های‌ عضلانی C2C12 Investigating the Effects of TNF-α knockdown Gene on Insulin Resistance in C2C12 Muscle Cells in the Presence and Absence of Palmitate بيوشمي Biochemistry پژوهشی Original مقدمه: مقاومت به انسولین نقص اصلی در دیابت نوع 2 و چاقی می‌باشد. طی این اختلال تجمع لیپید همراه با افزایش بیان TNF-α در عضله رخ میدهد. هدف پژوهش حاضر ارزیابی اثرات کاهش بیان TNF-α بر مولکولهای کلیدی مسیر پیام‌رسانی انسولین (IRS-1 و Akt) و مقاومت به انسولین در رده‌ی سلولهای عضلانی C2C12 در حضور و عدم حضور پالمیتات بود. مواد و روشها: برای کاهش بیانTNF-α ، سلولهای C2C12 با shRNA حاوی توالی آنتیسنس ژن TNF-α موشی ترانسفکت شدند. سپس، میزان بیان TNF-α، هم‌چنین فسفریلاسیون و بیان پروتئینهای IRS-1 و Akt با استفاده از آزمون وسترن بلات مورد ارزیابی قرار گرفت. یافتهها: در سلولهای کاهش بیان یافته TNF-α، میزان بیان پروتئین TNF-α، 58% کاهش یافت. در شرایط تیمار با پالمیتات 5/0 میلی‌‌مولار و انسولین 100 نانومولار، فسفریلاسیونهای تحریک شده با انسولین مولکولهای IRS-1 (Tyr632) وAkt (Ser473) در سلولهای کاهش بیان یافته نسبت به سلولهای کنترل، به ترتیب 7/1 و 6/2 بود. نتیجه‌گیری: یافته‌ها نشان داد کاهش بیان TNF-α میتواند فعالیت عناصر کلیدی مسیر پیام‌رسانی انسولین (IRS-1 و Akt) را افزایش داده و در نتیجه‌ی بهبود مقاومت به انسولین در میوتیوبها را سبب گردد. این یافتهها پیشنهاد میکنند TNF-α میتواند به عنوان یک هدف درمانی بالقوه در درمان مقاومت به انسولین القا شده با اسید چرب که در دیابت نوع 2 و سندروم متابولیک مشاهده میشود، مورد توجه قرار گیرد. Introduction: Insulin resistance plays a major role in type 2 diabetes and obesity. In this disorder, lipid accumulation is accompanied by increased TNF-α expression in the muscle. The aims of this study were to evaluate the effects of tumor necrosis factor-α (TNF-α) gene knockdown on key elements of insulin signaling pathway (IRS-1 and Akt) and insulin resistance in C2C12 muscle cells in the presence and absence of palmitate. Materials and Methods: To knockdown protein expression of TNF-α, the C2C12 cells were transfected with the shRNA containing antisense sequence of murine TNF-α gene. The analysis of TNF-α protein expression and phosphorylation and protein levels of IRS-1and Akt were subsequently detected by western blot. Results: In TNF-α knockdown cells, the protein expression level of TNF-α was reduced by 58%. Under treatment with palmitate, insulin stimulated phosphorylation of IRS-1 (Tyr632) and Akt (Ser473) in knockdown cells was increased 1.7 and 2.6 fold, respectively, compared to the controls. Conclusions: Our findings showed that decreasing the TNF-α protein level can enhance the activity of the important elements of insulin signaling pathway (IRS-1 and Akt), leading to the improvement of insulin resistance in myotubes, data suggesting that TNF-α may potentially be a therapeutic target for fatty acid induced insulin resistance observed in type 2 diabetes and metabolic syndrome. فاکتور نکروزدهنده‌ی تومور-آلفا (TNF-α)، RNA سنجاق سری کوچک (shRNA)، مقاومت به انسولین، کاهش بیان، پالمیتات Tumor necrosis factor- alpha, Short hairpin RNA interference, Insulin resistance, Knockdown, Palmitate 387 394 http://ijem.sbmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1555-1&slc_lang=fa&sid=1 Somayeh Pashaei سمیه پاشایی 4000319475328460021180 4000319475328460021180 No Salar Bakhtiyari سالار بختیاری bakhtiyari-s@medilam.ac.ir 4000319475328460021181 4000319475328460021181 Yes Karimeh Haghani کریمه حقانی 4000319475328460021182 4000319475328460021182 No Faraj allah Maleki فرج اله ملکی 4000319475328460021183 4000319475328460021183 No